Selektywna ekspresja antygenów Purkinjego w tkankach nowotworowych od pacjentów z paranowotworowym zwyrodnieniem móżdżku

PARANEOPLASTYCZNE zwyrodnienie móżdżkowe jest rzadkim, odległym efektem nowotworu, charakteryzującym się klinicznie szybko rozwijającymi się objawami skroniowo-kłębuszkowymi (oczopląs, dyzartria i aksamitna i ataksja chodu) i patologicznie przez powszechną utratę komórek Purkinjego móżdżku, któremu czasami towarzyszą nacieki zapalne okołonaczyniowe i leptomeningowe.1 , 2 Zaburzenie neurologiczne rozwija się zwykle, zanim rozpoznany zostanie podstawowy rak. W niektórych przypadkach kliniczne objawy raka nie pojawiają się przez miesiące, a nawet lata po wyłączeniu pacjenta z powodu zaburzenia neurologicznego.3 W klinicznie definiowalnej podgrupie pacjentów z paraneoplastycznym zwyrodnieniem móżdżkowym spowodowanym nowotworami ginekologicznymi wysokie miana przeciwciał anty-Purkinjego Autoprzeciwciała komórkowe (obecnie nazywane anty-Yo) zostały scharakteryzowane i przeciwciało zostało scharakteryzowane.3 4 5 6 Wyjątkowe występowanie przeciwciała anty-Yo u takich pacjentów spowodowało hipotezę, że niedobór móżdżku jest wynikiem działania autoimmunizacyjnego. wywołane zniszczenie funkcji komórek Purkinjego. Surowica anty-Yo została scharakteryzowana przez jej reaktywność z cytoplazmą komórek Purkinjego i przez rozpoznanie dwóch antygenów komórek Purkinjego, 62 i 34 kd.7. Nazwaliśmy je antygenami CDR (zwyrodnienie móżdżkowe) 62 i CDR 34. Wszystkie dotychczas analizowane próbki surowicy anty-Yo rozpoznają oba antygeny. CDR 62 jest głównym antygenem; reaktywność wobec CDR 34 jest zazwyczaj o rząd wielkości mniejsza. Niewiele wiadomo o funkcji tych białek w komórce Purkinjego. Gen kodujący CDR 34 wyizolowano, zsekwencjonowano, 8, 9 i zmapowano na długim ramieniu chromosomu X. Również gen kodujący CDR 62 został niedawno sklonowany i scharakteryzowany.11
Bodźce antygenowe tej odpowiedzi autoimmunologicznej są dotychczas niezidentyfikowane. W tym artykule opisujemy selektywną ekspresję antygenów komórek Purkinjego przez tkankę nowotworową od pacjentów z paraneoplastycznym zwyrodnieniem móżdżku, ale nie przez podobne guzy od pacjentów bez paraneoplastycznej degeneracji móżdżku. Odkrycia te wskazują, że ekspresja neuronów antygenów przez guzy może wyzwalać paranowotworowe zaburzenia neurologiczne.12
Metody
Tkanki i linie komórkowe
Neurony komórek Purkinjego oczyszczono z ludzkiej tkanki móżdżku zgodnie z metodą Yanagihary i Hamberger, 13 zmodyfikowaną przez Cunninghama i in. 7 Tkanka guza, surowica i płyn mózgowo-rdzeniowy uzyskano od pacjentów z paraneoplastycznym zwyrodnieniem móżdżku przez ich lekarzy. Tkanka guza od pacjentów bez wykrywalnego paraneoplastycznego zwyrodnienia móżdżku (określona w przeglądzie wykresu) została uzyskana z usługi pobierania guza z Memorial Sloan-Kettering Cancer Center, gdy tkanki stały się dostępne. Próbki tkanek z grupy kontrolnej i pacjentów z paraneoplastycznym zwyrodnieniem móżdżku zostały przetworzone identycznie.
Analiza Western Blot
Tkanki homogenizowano w soli fizjologicznej buforowanej fosforanem z 0,1% Nonidet P-40 i odwirowano przy 15000 xg przez 10 minut, a supernatant zatrzymano. Zawartość białka zmierzono zgodnie ze sposobem Bradforda14. Wskazane ilości białka poddano elektroforezie na 10% żelu sodowym z dodecylosiarczanem-poliakryloamidem i przeniesiono na nitrocelulozę, jak opisano w Towbin i wsp. 15. Filtry nitrocelulozowe blokowano następnie przez inkubacja za pomocą 5-procentowego Blotto (5% goździka wyparowało mleko w soli fizjologicznej buforowanej fosforanem) i inkubowano ze wskazaną ilością IgG anty-Yo przez dwie godziny w temperaturze pokojowej
[podobne: olx raciąż, ropne zapalenie migdałków podniebiennych, pollakisuria ]