Screening for Carriers of Tay-Sachs Disease wśród Żydów aszkenazyjskich – Porównanie testów opartych na DNA i enzymach ad

Analizę DNA rozszerzono na badanych aszkenazyjskich zidentyfikowanych jako normalne (brak nośności) lub jako nośniki przez analizę enzymatyczną, a wyniki analizy enzymów i DNA porównywano. Metody
Źródła DNA
Fibroblasta z linii komórkowych ustalonych od pacjentów z chorobą Tay-Sachsa (GM02968, GM00515A i GM00502B) uzyskano z Human Genetic Mutant Cell Repository (Camden, NJ). Fibroblasty lub leukocyty od innych pacjentów i obligatoryjne nosiciele infekcyjnej choroby Tay-Sachsa lub gangliozydozę GM2 dorosłego byli dostarczani przez programy zapobiegania Boston i Toronto Tay-Sachs. Centra te zapewniały również peletki i sonikaty leukocytów, które zostały przetestowane enzynistycznie w swoich programach.
Wybór próbek
Peletki i sonikaty leukocytów z centrum Toronto pochodziły z części próbek pochodzących od normalnych podmiotów oraz ze wszystkich próbek od przewoźników, których oceniano w latach 1987-1989. Próbki dostarczone przez centrum Bostonu uzyskano tylko od obligatoryjnych nosicieli, zidentyfikowanych enzynistycznie nosicieli i pacjentów z chorobą. Każdy biologiczny rodzic płodu lub dziecka z jakąkolwiek postacią choroby Tay-Sachs był uważany za obligatoryjnego nosiciela. Trzema obowiązkowymi nosicielami byli rodzice chorego płodu, u których rozpoznanie choroby Tay-Sachsa potwierdzono dwiema metodami. Losowymi nosicielami i nie-przewoźnikami były osoby pochodzenia żydowskiego aszkenazyjskiego (tj. Wywodzące się od Żydów z Europy Środkowej lub Wschodniej). Próbka została wykluczona, jeśli dana osoba nie pochodziła z aszkenazyjskiego pochodzenia lub była krewnym zidentyfikowanego enzymatycznie lub obligatoryjnie. Analizę DNA przeprowadzono bez znajomości wyników analizy enzymatycznej. Częstotliwości alleli próbek z centrów Bostonu i Toronto zostały porównane za pomocą testu chi-kwadrat z tabeli kontyngencji dwóch na trzy, z dwoma stopniami swobody.
Test aktywności heksosaminidazy A.
Stężenie heksozoaminidazy w surowicy określano metodą ręczną w Bostonie, a metodą automatyczną w Toronto 173,31 Heksosaminidazę mierzono w leukocytach, jeśli pacjent był znany z ciąży, przyjmował doustne środki antykoncepcyjne lub miał poziom enzymu w surowicy krwi. zakres wartości, które były niejednoznaczne lub wskazywały status przewoźnika. W konsekwencji, podczas gdy poziomy enzymów w 48 procentach próbek od zdrowych osobników mierzono w surowicy, poziomy w większości próbek od nośników mierzono w leukocytach. W raporcie tym wartości surowicy różnią się od wartości leukocytów tylko wtedy, gdy zmieniają średnią wyników analizy enzymatycznej.
Leukocyty przygotowywano z krwi pełnej zebranej w probówkach zawierających heparynę za pomocą precypitacji dekstranowej17 lub zmodyfikowanej procedury dekstranu.19 Aktywność heksozoaminidazy A w obu ośrodkach oznaczono sztucznym substratem 4-metylo-unibellizylo-.-DN-acetyloglukozaminidu i oznaczeniem opartym na różnicowanie termiczne.17 Analizę statystyczną wyników testów enzymatycznych w grupach normalnych i nośnikowych (kontrolnych) przeprowadzono w sposób opisany przez Kabacka i in. 17 w celu ustalenia odpowiednich zakresów referencyjnych; każdy zakres był unikalny dla każdego centrum.
Ośrodki w Toronto i Bostonie są akredytowane przez Międzynarodowy Program Zapobiegania Tay-Sachs, zarządzany w ramach Kalifornijskiego Programu Testowania, w celu utrzymania standardów kontroli jakości w badaniach przesiewowych w kierunku choroby Tay-Sachs.
Przygotowanie DNA
DNA przygotowano z fibroblastów lub peletek leukocytów otrzymanych przez strącanie dekstranu.31 Około 1/3 granulatu leukocytów, zdyspergowanego w wodzie lub 100 .l sonikatu leukocytów wykorzystano do przygotowania DNA
[patrz też: renta na nerwice, jakie badanie na tarczyce, staloral 300 ]